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RIPA裂解液(强)

RIPA裂解液(强)

简要描述:RIPA裂解液(强)可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白,提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。

产品型号:

所属分类:蛋白提取

更新时间:2021-01-13

厂商性质:生产厂家

详情介绍
品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,环保,生物产业,农业
RIPA裂解液(强)
RIPA Lysis Buffer
Cat No:DY7001
 Size:100ml
         
产品组分       
  组分 Contents LY7001   
  RIPA裂解液 100ml   
         
储运条件       
 4℃保存。
         
说    明       
 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。  
产品简介       
    RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类,具体特点和差异请参考附表2,可根据实验需求选择相应产品。可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白,提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western BlotIP等检测分析。
 
主要成分为50mM TrispH 7.4),150mM NaCl1%Triton X-1001% sodium deoxycholate0.1% SDS以及sodium orthovanadatesodium fluorideEDTAleupeptin等多种抑制剂,可有效抑制蛋白降解。
实验前准备及注意事项      
 1.为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。
 2.使用RIPA裂解液得到的蛋白样品,可采用BCA法进行蛋白定量,以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购,如:LY7052 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂,不能用Bradford法进行蛋白定量。
 3.建议在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,以防止蛋白降解,或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购,如:LY7150 蛋白酶抑制剂混合物,LY7151 磷酸酶抑制剂混合物。
 4.若需获得更高浓度的蛋白,应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
 5. 对于培养瓶中的贴壁细胞,推荐先使用常规方法消化细胞,再参考悬浮细胞蛋白提 取步骤操作。
 6.对于离心获得的细胞,若不确定细胞体积,可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液,以此类推。
操作步骤  
 一、细胞样品
                     贴壁细胞蛋白抽提
 1.小心倾去贴壁细胞的培养液。
 2.可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请先使用预冷的 PBS漂洗细胞。
 3.加入适量RIPA裂解液(使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂),试剂使用量请参考附表1,在冰上用枪头吹打贴壁细胞。
   表 1 贴壁细胞 RIPA 裂解液使用量推荐表 
  细胞培养板类型或培养面积裂解液使用量  
  100 mm *500-1,000 µl  
  60 mm 250-500 µl 
  6 孔培养板200-400 µl /孔  
  24 孔培养板100-200 µl /孔  
  96 孔培养板 50-100 µ l /孔 
 * 对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白(细胞类型不同略有差异)。
 4.将裂解液转移至新的离心管中,冰上孵育20min,使细胞充分裂解。
 5.14,000×g离心10min。转移上清液至新管中,进行下一步分析。
                        悬浮细胞蛋白提取
 1.悬浮细胞2,500×g,离心5min,弃去上清。
 2.可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5min,弃去上清。
 3.加入适量RIPA裂解液(使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂),每5×106细胞加入约200-500 µl RIPA裂解液,吹打均匀。
 4.冰上放置20min,使细胞充分裂解。
 5.14,000×g离心10min。转移上清液至新管中,进行下一步分析。
         
 二、组织样品
 1.取适当的RIPA裂解液,在使用前2-3min内加入蛋白酶抑制剂。 
 2.称量实验组织的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细小碎片,用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
 3.冰上孵育20min,使细胞充分裂解。
 4.14,000×g 离心10min。转移上清液至新管中,进行下一步分析。
 注:RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为基因组。

 

 

                    表2 蛋白裂解液性能、参数比较
 目录号LY7001LY7020LY7021
 产品名称RIPA裂解液(强)RIPA裂解液(中) RIPA裂解液(弱) 
 有效裂解成分1%Triton X-100,
1% sodium
deoxycholate,
0.1% SDS
1% NP-40,
0.5% sodium
deoxycholate,
0.1% SDS
1% NP-40,
0.25% sodium
deoxycholate
 裂解强度 温和
 膜蛋白提取很好较好 一般 
 胞浆蛋白提取 很好很好 很好
 核蛋白提取很好 较好较好
 主要用途 WB,IPWB,IPWB,IP,CO-IP


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