欢迎光临北京德元国际科技有限公司网站!
全国服务咨询热线:

13910837690

产品中心/PRODUCT
相关文章/articles
产品展示 / products 您的位置:网站首页 > 产品展示 > 蛋白检测 > 蛋白提取 > SDS裂解液
SDS裂解液

SDS裂解液

简要描述:SDS裂解液:融解 SDS 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的终浓度为 1 mM。

产品型号:

所属分类:蛋白提取

更新时间:2021-01-13

厂商性质:生产厂家

详情介绍
品牌其他品牌供货周期现货
应用领域医疗卫生,环保,生物产业,农业

SDS裂解液

SDS Lysis Buffer
Cat No:DY7008
 Size:100ml
         
产品组分       
  组分 Contents  DY7003A  
  SDS裂解液  100 ml  
         
储运条件       
 本产品-20℃ 保存。
         
说    明       
 本产品仅供科研使用,请勿用于临床诊断及其他用途。  
产品简介       
    SDS 裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、ChIP(染色质免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等实验。SDS 裂解液的主要成分为 50mM Tris(pH8.1),1% SDS,以及 2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4等多种抑制剂,可以有效抑制蛋白降解。
    SDS 裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA 蛋白浓度测定试剂盒(LY7052)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。 
实验前准备及注意事项      
 1. 为取得好的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。 
 2.为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。
 3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 
操作步骤 
                         一、培养细胞样品
 1. 融解 SDS 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的终浓度为 1 mM。 
 2.1对于贴壁细胞:
    去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。 通常裂解液接触细胞 1-2 s后,细胞就会被裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 min。 
 2.2对于悬浮细胞: 
    离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞加入150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。如果细胞量较多,必需将细胞分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 min。 
 3. 充分裂解后,10000-14000×g 离心 3-5 min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。 
 注意:对于裂解液的用量,通常 6 孔板每孔细胞加入 150μl 裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到 200 μl 或 250
μl。如果用于 ChIP,建议 6 孔板每孔细胞至少加入 200μl 裂解液。 
                        二、组织样品:
 1. 把组织剪切成细小的碎片。 
 2. 融解 SDS 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的终浓度为 1 mM。 
 3. 按照每 20 mg 组织加入150-250 μl SDS 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。 
 4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。如果用于 ChIP,初步裂解后需在冰浴上继续裂解 10 min。 
 5. 充分裂解后,10000-14000×g 离心 3-5 min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。 
 注意:若组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈涡旋使样品裂解充分。10000-14000×g 离心 3-5 min,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和 ChIP 等操作。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分


留言询价

留言框

  • 产品:

  • 您的单位:

  • 您的姓名:

  • 联系电话:

  • 常用邮箱:

  • 省份:

  • 详细地址:

  • 补充说明:

  • 验证码:

    请输入计算结果(填写阿拉伯数字),如:三加四=7
技术支持:化工仪器网   sitemap.xml   管理登陆
© 2021 版权所有:北京德元国际科技有限公司   备案号:京ICP备10052592号-8

联系我们

contact us

咨询电话

扫一扫,关注我们

返回顶部